Formats des paquets (4)
code | format d’emballage | prix par unité | prix de boîte par unité | |
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Code et emballage | Prix par pièce | |||
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code
A3830,0220
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format d’emballage
220 mg
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Produit abandonné. Autre produit A3830,0100 (veuillez vérifier les spécifications).
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code
A3830,0025
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format d’emballage
25 mg
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prix par unité
simple
50,00€
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prix de boîte par unité
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code
A3830,0100
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format d’emballage
100 mg
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prix par unité
simple
103,60€
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prix de boîte par unité
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code
A3830,0500
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format d’emballage
500 mg
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prix par unité
simple
346,30€
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prix de boîte par unité
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Données techniques
- Solubility:
- soluble (H2O)
- Product Code:
- A3830
- Product Name:
- Proteinase K, lyophilized
- Short Description:
- delivery form: lyophilized
- Specifications:
- DNases/RNases: not detectable
Activity: min. 30 mAnsonU/mg
Appearance: white
pH (1 %; H2O; 20°C): 6.2 - 6.8
- Pictogrammes de danger
-
- WGK:
- 1
- Storage:
- 2 - 8°C
- Signal Word:
- Danger
- GHS Symbols:
- GHS07
GHS08
- H Phrases:
- H315
H319
H334
H335
- P Phrases:
- P284
P305+P351+P338
P342+P311
P403+P233
P405
P501
- Origin:
- from Tritirachium album
- EINECS:
- 254-457-8
- CS:
- 35079090
- Index Nr.:
- 647-014-00-9
Documents
Demande d’information
Comments
A propos de la protéinase KEn biologie moléculaire, la protéinase K (EC 3.4.21.64, protéase K, endopeptidase K, protéinase alcaline de Tritirachium, protéinase à sérine de Tritirachium album, protéinase K de Tritirachium album) est une protéase à sérine à large spectre. L'enzyme a été découverte en 1974 dans des extraits du champignon Engyodontium album (anciennement Tritirachium album). La protéinase K digére les cheveux (kératine), d'où son nom de "protéinase K". Le site de clivage le plus fréquent est la liaison peptidique à côté du groupe carboxyle des acides aminés aliphatiques et aromatiques avec des groupes alpha-amino bloquants. La protéinase K est souvent utilisée en raison de sa grande spécificité. La protéinase K appartient à la famille des peptidases S8 (subtilisine). Le poids moléculaire de la protéinase K est de 28 900 daltons (28,9 kDa).
Activité de la protéinase K
Activée par le calcium, l'enzyme protéinase K digère les protéines de préférence pour les acides aminés hydrophobes (acides aminés aliphatiques, aromatiques et autres hydrophobes). Les ions calcium n'influencent pas l'activité de l'enzyme, mais contribuent à sa stabilité. Les protéines sont complètement digérées si le temps d'incubation est long et si la concentration de proteinase est élevée. Lorsque les ions calcium sont éliminés, la stabilité de l'enzyme est réduite, mais l'activité protéolytique est maintenue. La protéinase K possède deux sites de liaison pour le Ca2+, bien que proches du site actif, ne sont pas directement impliqués dans le mécanisme catalytique. L'activité résiduelle -sans Ca2+- est suffisante pour digérer les protéines normalement présentes lors des préparations d'acides nucléiques. De ce fait, la digestion de la protéinase K pour la purification des acides nucléiques est le plus souvent effectuée en présence d'EDTA (inhibition des enzymes dépendantes des ions métalliques comme les nucléases).
Stabilité de la protéinase K
La protéinase K est stable dans une large gamme de pH (4-12), le pH optimal d’activité enzymatique est de 8,0. L'augmentation de la température de réaction de 37 °C à 50-60 °C augmente fortement l'activité enzymatique, tout comme l'ajout de 0,5-1 % de dodécylsulfate de sodium (SDS) ou de chlorure de guanidinium (3 M), de thiocyanate de guanidinium (1 M) et d'urée (4 M). Les conditions décrites ci-dessus augmentent l'activité de la protéinase K en rendant plus accessibles les sites de clivage de son substrat. Des températures supérieures à 65 °C, l'acide trichloracétique (TCA) ou les inhibiteurs de protéase à sérine AEBSF, PMSF ou DFP inhibent l'activité. La protéinase K n'est par contre pas inhibée par le chlorure de guanidinium, le thiocyanate de guanidinium, l'urée, le sarcosyl, le Triton X-100, le Tween 20, le SDS, le citrate, l'acide iodoacétique, l'EDTA ou d'autres inhibiteurs de sérine protéase tels que la Nα-tosyl-Lys chlorométhylcétone (TLCK) et la Nα-tosyl-Phe chlorométhylcétone (TPCK).
Applications de la protéinase K
La protéinase K est largement utilisée en biologie moléculaire pour digérer les protéines et éliminer les impuretés des préparations d'acides nucléiques. En ajoutant la protéinase K aux préparations d'acides nucléiques, les nucléases qui pourraient autrement dégrader l'ADN ou l'ARN pendant la purification sont rapidement inactivées. La protéinase K est bien adaptée à ces preparations d’extraction car l'enzyme est active en présence de produits chimiques dénaturants les protéines comme le SDS et l'urée, d'agents chélateurs comme l'EDTA, de réactifs à base de sulfure d'hydrogène et d'inhibiteurs de trypsine ou de chymotrypsine. La protéinase K est utilisée pour la destruction des protéines dans les lysats cellulaires (tissus, cellules de culture cellulaire) et pour la libération des acides nucléiques. La protéinase K inactive efficacement les DNases et les RNases. Quelques exemples d'applications : La protéinase K est très utile pour la purification d'ADN ou d'ARN naturels et non endommagés, car la plupart des DNases et RNases microbiennes ou mammaliennes sont rapidement inactivées par l'enzyme, en particulier en présence de 0,5-1% de SDS. L'activité de l'enzyme envers les protéines natives est stimulée par des dénaturants tels que le SDS. En revanche, lorsqu'elle est mesurée avec des substrats peptidiques, les dénaturants inhibent l'enzyme.
Inhibiteurs de la protéinase K
La protéinase K possède deux liaisons disulfure. Une activité protéolytique accrue en présence d'agents réducteurs (par exemple, le DTT 5 mM) est observée, ce qui indique que la réduction présumée de ses propres liaisons disulfure ne conduit pas à son inactivation. La protéinase K est inhibée par les inhibiteurs de protéase à sérine tels que le fluorure de phénylméthylsulfonyle (PMSF), le fluorophosphate de diisopropyle (DFP) ou le fluorure de 4-(2-aminoéthyl)benzènesulfonyle (AEBSF). L'activité de la protéinase K n'est pas affectée par les réactifs modificateurs de sulfite tels que l'acide para-chloromercuribenzoïque (PCMB), la N-alpha-tosyl-L-lysyl chlorométhyl cétone (TLCK) ou la N-alpha-tosyl-l-phénylalanine chlorométhyl cétone (TPCK), bien qu'elle soit susceptible d'être inhibée lorsque ces réactifs sont utilisés conjointement avec des réactifs disulfures réducteurs qui exposent les thiols normalement indisponibles de la protéinase K.
FAQs
Quel est le numéro CAS de la protéinase K?
Le numéro CAS de la protéinase K est 39450-01-6.CAS Protéinase K ?
Le numéro CAS de la protéinase K est 39450-01-6.CAS 39450-01-6?
Le numéro CAS 39450-01-6 est attribué à la protéinase K.L'inactivation de la protéinase K est peut-être l'une des questions les plus fréquentes que nous recevons. Et la réponse est très simple. La chaleur est une méthode couramment utilisée pour inactiver la protéinase K. Alors que l'activité de la protéinase K augmente avec la température et est optimisée à environ 65 ˚C, le chauffage à 95 ˚C pendant 10 minutes inactive la protéinase K. Cependant, il faut noter que le chauffage de la protéinase K n'inactive pas complètement l'enzyme. Une petite quantité d'activité subsiste toujours avec cette méthode. Les inhibiteurs de protéase tels que le PMSF et l'AEBSF (Pefabloc®) peuvent également être utilisés pour inactiver définitivement la protéinase K. Remarque: la température réelle d'inactivation est controversée et varie de 70 à 95 ˚C. Cependant, sur la base des commentaires du public et de recherches approfondies, nous avons décidé que la meilleure température d'inactivation est de 95 ˚C.
Quelle est la température optimale pour l'activation de la protéinase K?
Comme mentionné dans la question 1, l'activité de la protéinase K augmente avec la température (dans une certaine mesure). La température optimale pour l'activité se situe entre 50 et 65 ˚C. Les températures plus élevées favorisent le clivage des protéines et permettent à la protéinase K de les dégrader plus facilement. Mais l'optimisation de la protéinase K n'est peut-être pas la partie la plus importante de votre procédé. Parfois, des techniques spéciales nécessitent des températures adaptées pour obtenir les meilleurs résultats globaux. Par conséquent, vous devez également garder à l'esprit que, bien que la plage de température rapportée pour l'activité de la protéinase K soit large, l'enzyme est toujours active à des températures comprises entre ~20 et 65 ˚C, et que cette grande flexibilité de température peut être utile pour des méthodes très spécifiques que vous effectuez. À des températures supérieures à 65 ˚C, il y a un risque que la protéinase K devienne inactive.Quelle est la relation exacte entre la protéinase K et le calcium?
La protéinase K se lie à deux ions Ca2+ qui contribuent à maintenir la stabilité de l'enzyme, notamment lorsqu'elle est exposée à des températures élevées. Le calcium protège également la protéinase K de l'autolyse. Le rapport calcium/chaleur contribue à maintenir la thermostabilité de la protéinase K, mais n'est pas nécessaire à l'activité protéolytique. Selon Richard Tullis et Harvey Rubin, cette relation devient encore plus intéressante lorsque la DNase I est impliquée. La protéinase K est connue pour inactiver les DNases et les RNases, mais lorsque la DNase I est en présence de Ca2+, elle est protégée par la protéinase K (concentration de 1 mg/mL). La RNase, par contre, est inactivée, que le Ca2+ soit présent ou non. Vos résultats suggèrent une méthode pour traiter la RNase contaminée sans DNaseI ou pour purifier l'ARN hautement polymérisé.L'EDTA inactive-t-il la protéinase K?
Cette question semble également revenir fréquemment lorsqu'on parle de la protéinase K. Les agents chélateurs tels que l'EDTA ou l'EGTA n'ont pas d'effet direct sur l'activité enzymatique de la protéinase K. La raison pour laquelle on utilise l'EDTA avec la protéinase K pendant la purification de l'ADN ou de l'ARN est généralement d'éliminer le calcium (voir également la question n°3). Cependant, étant donné que le calcium est lié à la stabilité de la protéinase K, l'ajout d'EDTA peut affecter le calcium et donc réduire l'activité de la protéinase K dans une certaine mesure.Que sont les activateurs de la protéinase K?
Les activateurs de la protéinase K sont le SDS (dodécylsulfate de sodium) et l'urée. En général, la protéinase K devient plus stable et plus active dans les tampons contenant ces activateurs.Comment la protéinase K joue-t-elle un rôle dans la lyse cellulaire ?
Pour répondre à cette question, nous devons d'abord savoir ce qu'est la protéinase K. Il s'agit d'une protéase à large spectre capable de digérer un large éventail de protéines natives (voir ci-dessous pour plus de détails). Lors de la lyse cellulaire, en particulier lors de l'isolement et de la purification ultérieurs de l'ADN, la protéinase K peut faire partie des étapes de la lyse en digérant les protéines de surface. Plus tard dans le processus, lorsque vient le moment de remettre en suspension et de lyser les noyaux dans un tampon contenant de la protéinase K, la protéinase K contribue à la digestion des protéines qui, autrement, dégraderaient l'échantillon.Why do many recipes for DNA extraction buffers require the use of proteinase K and RNase?
Cette question revient sans cesse car la suggestion semble être une contradiction. La protéinase K est connue pour digérer les RNases. Alors pourquoi mettre les deux ensemble dans un tampon de lyse? Tout d'abord, vous voulez ajouter de la RNase parce qu'elle dégraderait l'ARN contaminant pendant la purification de l'ADN. Et vous voulez utiliser la protéinase K parce qu'elle peut dégrader les protéines nuisibles, les DNases et les RNases. La réponse à cette question est une question de timing et d'optimisation. Certains chercheurs suggèrent d'ajouter d'abord la RNase et de lui laisser le temps d'agir. La protéinase K et le SDS peuvent ensuite être ajoutés pour dégrader les protéines indésirables. Certains protocoles nécessitent une incubation du SDS, de la protéinase K et de la RNase à 37˚C pendant un certain temps. L'activité de la protéinase K n'étant pas aussi optimisée à cette température, cela donne probablement à la RNase plus de temps pour agir. Les étapes suivantes du protocole suggèrent une seconde incubation à 55 ˚C pendant une période plus longue, ce qui serait une température optimale pour l'activité de la protéinase K et lui permettrait de digérer d'autres protéines indésirables.Pour quelles applications la protéinase K est-elle utilisée?
La protéinase K est une protéase à sérine à large spectre qui appartient à la classe des protéases de type subtilisine (il existe deux types de protéases à sérine, de type chymotrypsine et de type subtilisine). En tant que protéase à large spectre, elle est principalement utilisée pour l'isolement des acides nucléiques: ADN génomique, ARN cytoplasmique, ADN et ARN à haute négativité, etc. Elle est idéale pour ces applications car la protéinase K est capable de dégrader les protéines et d'inactiver les DNases et RNases qui, autrement, dégraderaient un échantillon d'ADN ou d'ARN souhaité. Pour simplifier la liste, la protéinase K est utilisée pour : la digestion des protéines indésirables dans les applications de biologie moléculaire, l'élimination des endotoxines liées aux protéines cationiques telles que le lysozyme et la RNaseA, l'élimination des nucléases pour l'hybridation in situ, la recherche sur les prions liée aux EST (encéphalopathies spongiformes transmissibles), l'empreinte protéasique, la purification des mitochondries, la purification de l'ADN génomique, la purification de l'ARN cytoplasmique, la purification de l'ADN ou de l'ARN à haute négativité.Solution mère: normalement les solutions mères sont stables à -20˚C jusqu'à 1 an. Poudre lyophilisée: normalement, les poudres lyophilisées sont séchées à -20 ˚C jusqu'à 2 ans. Toutefois, les dispositions des certificats d'analyse des fabricants respectifs s'appliquent, qui peuvent différer de cette déclaration.