Rifampicina

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La rifampicina es una rifamicina semisintética. Inhibe la transcripción procariota durante la "limpieza del promotor", es decir, la transición de la iniciación a la elongación de la transcripción por la ARN polimerasa. La ARN polimerasa está probablemente "detenida" en el complejo de transcripción inicial y sólo sintetiza ARN muy cortos. La rifampicina provoca un bloqueo estérico durante la translocación de la polimerasa o bien desestabilizando el complejo de transcripción inicial, liberando los oligonucleótidos en crecimiento. También se inhibe la ARN polimerasa en las células de mamíferos, pero sólo a concentraciones más altas (5 - 10 μg/ml). La rifampicina se utiliza en biología molecular para la expresión de proteínas con el sistema promotor T7. Al inhibir la ARN polimerasa de E. coli, se puede reducir el fondo de proteínas bacterianas. Sin embargo, esto no aumenta necesariamente la acumulación de la proteína expresada. Por lo tanto, la aplicación sólo se recomienda si la proteína expresada está marcada con [35S]-metionina. Estabilidad: La rifampicina es fácilmente soluble en metanol (15 mg/ml) y muy soluble en DMSO (~100mg/mL) o cloroformo. La rifampicina es poco soluble en etanol o agua. Cuando se diluye en soluciones acuosas, es relativamente estable. En el rango de pH alrededor de 2, se hidroliza fácilmente; en valores de pH superiores a 7, se oxida ligeramente con la adición de oxígeno. La adición de ácido ascórbico protege contra la oxidación. En soluciones alcalinas, puede producirse una ligera descomposición. En DMSO como disolvente, la rifampicina permanece estable durante varios meses. También se puede preparar una solución madre a una concentración de 15 mg/ml en metanol y almacenarla en la oscuridad a +4°C durante unas 2 semanas. La concentración de trabajo es de 150 - 200 μg/ml. La rifampicina es sensible a la luz. Las soluciones y las placas de agar que contienen el antibiótico también deben guardarse en la oscuridad.

Literature

(1) Schulz, W. & Zillig, W. (1981) Nucleic Acids Res. 9, 6889-6906. Inhibición de la síntesis de ARN por parte de la rifampicina mediante la desestabilización de los complejos ADN-ARN polimerasa-oligonucleótidos. (2) Jin, D.J. & Turnbough, Jr., C.L. (1994) J. Mol. Biol. 236, 72-80. Una ARN polimerasa de E. coli defectuosa en la transcripción debido a su sobreproducción de productos de iniciación abortivos.