Cloramfenicol BioChemica

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El cloranfenicol se aisló de Streptomyces venezuelae. Es activo contra muchas bacterias grampositivas y gramnegativas y actinomicetos. El cloranfenicol inhibe la formación de polisomas y la biosíntesis de proteínas al unirse al ribosoma bacteriano. La inhibición de la biosíntesis de proteínas en eucariotas se observa a concentraciones entre 20 y 100 veces superiores a las requeridas por las bacterias. La enzima cloranfenicol acetiltransferasa (CAT; EC 2.3.1.28; ref. 1) confiere resistencia al antibiótico. Por lo tanto, el gen correspondiente se utiliza ampliamente como marcador de selección en los plásmidos. La enzima CAT tiene un contenido relativamente alto de residuos de histidina. Esto se traduce en una copurificación con proteínas marcadas con His en columnas de Ni NTA (cromatografía de afinidad), si la proteína marcada con His fue expresada en cepas de E. coli resistentes al cloranfenicol. Se recomienda no utilizar dichas cepas bacterianas para la expresión de proteínas recombinantes marcadas con His (2). Estabilidad: La sustancia cristalina cloranfenicol es estable durante aproximadamente 5 años. En soluciones acuosas, la estabilidad depende de la temperatura: A 100°C es estable durante 5 horas, a 37°C se observa una inactivación del 50% después de 6 meses, a +5°C durante 2 años. La estabilidad se reduce a pH superior a 9,5 por hidrólisis del antibiótico. El cloranfenicol es soluble en agua (2,5 - 4,4 mg/ml a 25 - 28°C), de baja solubilidad a pH entre 5,5 y 7. La solubilidad en alcohol o etilenglicol (> 20 mg/ml) es significativamente mayor. Las soluciones madre se preparan a concentraciones de 10 mg/ml en metanol o hasta 34 mg/ml en etanol. Almacenar las soluciones a -20°C. La concentración de trabajo es de 20 - 25 μg/ml para plásmidos estrictos y 170 μg/ml para plásmidos relajados.

Literature

(1) Shaw, W.V. (1975) Methods Enzymol. 43, 737-755. Cloranfenicol acetiltransferasa de bacterias resistentes al cloranfenicol. (2) Oswald, T. & Rinas, U. (1996) Anal. Biochem. 236, 357-358. La resistencia al cloranfenicol interfiere en la purificación de las proteínas "His-tag". (3) Sambrook, J. & Russell, D.W. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd Edition. Página A2.6. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.