Histologie

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Histologie

L'histologie est le domaine de la biologie qui étudie la composition, la structure et les caractéristiques des tissus organiques des êtres vivants. L'histologie est étroitement liée à l'anatomie microscopique.

L’histologie ne s'arrête pas aux tissus, mais va au-delà, en observant également les cellules et les autres corpuscules, et est liée à la biochimie, à la cytologie et à la médecine.

L'histologie est importante en médecine et en biologie, se situant à l'intersection de la biochimie, de la biologie moléculaire et de la physiologie, d'une part, et des processus pathologiques et de leurs conséquences, d'autre part.

Les techniques classiques d'histologie sont appliquées dans les laboratoires médicaux pour le diagnostic.

Lorsque le diagnostic avec ces techniques classiques d’histologie n’est pas posé ou nécessite des confirmations, des méthodes complémentaires sont utilisées. Ces techniques comprennent les colorations histochimiques, les méthodes immunohistochimiques, l'hybridation de l'ADN, l'hybridation in situ en fluorescence (FISH), la PCR, la cytométrie de flux et autres.

Les produits de la marque PanReac AppliChem sont destinés aux :

  • Laboratoires médicaux : Produits de microscopie.
  • Laboratoires de recherche : Produits de génomique, protéomique et de culture cellulaire.

Les laboratoires médicaux
Les laboratoires médicaux peuvent être classés en fonction du type de contrôle effectué.

  • Les laboratoires hospitaliers et cliniques : laboratoires intégrés dans un hôpital/clinique pour effectuer des tests sur les échantillons des patients. 4 types de laboratoires sont présents :
  • Les laboratoires de pathologie clinique : hématologie, histopathologie, cytologie, pathologie de routine.
  • Les laboratoires de microbiologie clinique : bactériologie, mycobactériologie, virologie, mycologie, parasitologie, immunologie, sérologie.
  • Laboratoires de biochimie clinique : analyses biochimiques, dosages hormonaux, etc.
  • Laboratoire de diagnostic moléculaire ou laboratoire de cytogénétique et de biologie moléculaire.
  • Laboratoires d’analyses cliniques externes : ces laboratoires effectuent des tests de routine complétés par des tests spécialisés.

ITW Reagents propose une gamme complète de produits pour l'histologie sous la marque PanReac AppliChem La gamme comprend les réactifs communément utilisés pour la préparation des échantillons pour l'examen microscopique. Cette gamme couvre les étapes de fixation, de nettoyage, d’inclusion en paraffine, de la coloration et du montage. La gamme des réactifs d’histologie ITW est complétée par des produits spécifiques pour les essais complémentaires que soit en génomique, protéomique et/ou culture cellulaire.

De nombreux produits de la marque PanReac AppliChem utilisés en microscopie portent le marquage CE IVD, conformément au nouveau règlement européen (UE) 2017/746 sur les produits de diagnostic in vitro (IVDR).

Techniques et étapes du traitement histologique
Bien que la plupart des étapes du traitement histologique soient communes, certaines d'entre elles sont propres à un seul type de traitement d'échantillon. Par exemple, l'enrobage n'est effectué que sur les tissus et la fixation thermique que sur les échantillons de sang.

Techniques et étapes du traitement histologique
Les étapes les plus courantes et les produits utilisés sont les suivants :

  • La fixation : La fixation interrompt les processus de dégradation se produisant après la biopsie. L’étape de fixation a pour objectif de préserver l'architecture et la composition des tissus/cellules aussi proche que possible de ce qu'elles étaient dans l'organisme vivant. La fixation la plus courante est la fixation chimique avec du Formaldéhyde 3,7-4,0% p/v tamponné à pH=7 et stabilisé avec du méthanol. Des formats en petits volumes sont proposés pour une sécurité accrue, dont le conservateur Histofix® Formaldéhyde en dose unique prêt à l'emploi.
  • Déshydratation et clarification : Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 6µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation.
  • Déshydratation : Les échantillons fixés dans des solutions aqueuses ne peuvent être imprégnés en paraffine directement. L’eau des tissus doit être éliminée par déshydratation dans une succession de bains d’éthanol de concentration croissante (70%, 95% à 100%).
  • Clarification : Bien que le tissu soit maintenant essentiellement exempt d’eau, il ne peut toujours pas être imprégné dans la paraffine car celle-ci est non miscible dans l’éthanol. Il faut utiliser un solvant intermédiaire miscible à la fois dans l’éthanol et dans la paraffine. L’agent de clarification le plus couramment utilisé est le xylène.
  • Inclusion ou Imprégnation : par inclusion, l'eau contenue dans le tissu est remplacée par un milieu liquide capable de se solidifier dans des conditions de température appropriées. On utilise à cet effet la paraffine P.F. 55-58°C plastifiée + DMSO en lentilles ou simplement la paraffine P.F. 56-58°C en lentilles.
  • Découpage : Les tissus inclus dans la paraffine sont coupés assez finement (4-6 microns) pour permettre à la lumière de les traverser afin de les examiner au microscope. Cette opération est réalisée à l'aide d'un microtome : un instrument mécanique utilisé pour réaliser des coupes micrométriques de tissus. Nous recommandons notre nettoyant pour paraffine afin de garder le microtome propre.
  • Déparaffinage-Hydratation : Le déparaffinage-hydratation est le processus qui consiste à retirer le milieu d'enrobage des sections de tissu enrobées de paraffine et à les réhydrater pour une bonne pénétration des colorants. Les réactifs les plus courants à ce stade sont les alcools tels que l'éthanol absolu, l'éthanol 96%, l'éthanol 70% qui peuvent être dénaturés ou non, ainsi que le xylène.
  • Coloration : La plupart des tissus, surtout ceux d'origine animale, sont incolores à moins qu'ils ne contiennent un pigment. Il est donc nécessaire de les colorer pour une observation microscopique. Pour ce faire, on utilise des colorants, substances qui, au contact d'un support adéquat, s'y fixent de façon durable en transmettant sa couleur. Les colorants les plus utilisés sont l'hématoxyline et l'éosine, mais il existe une grande variété de colorants en fonction du tissu à colorer.
  • Montage et immersion : Une fois que les préparations ont été rincées, elles doivent être montées définitivement. Les agents de montage peuvent être aqueux ou non aqueux ; le type utilisé dépend du protocole concerné. Des exemples de milieux de montage sont DPX, Canada Balsam et Eukitt®. Les milieux d'immersion sont des liquides, souvent des huiles naturelles, qui ont un indice de réfraction défini. Il est important que l'indice de réfraction soit d'environ 1,5 (même indice que le verre). Cela permet une immersion homogène dans l'huile. On utilise à cet effet l'huile d'immersion ou l'huile de cèdre.
  • Analyse microscopique : Il s'agit de la phase d'observation microscopique. Aucun réactif supplémentaire n'est nécessaire.

Bien que la plupart des étapes du traitement histologique soient communes, certaines d'entre elles sont propres à un seul type de traitement d'échantillon. Par exemple, l'enrobage n'est effectué que sur les tissus et la fixation thermique que sur les échantillons de sang.

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